組織研磨儀在豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測樣品方法中的應(yīng)用

    豬瘟檢測,主要監(jiān)測手段是實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,大致流程步驟為:樣品研磨(制備樣品)----磁珠提取(提取DNA,RNA)----結(jié)合**試劑盒上實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測。而在樣品研磨過程中采用組織研磨儀GD200、GD300、GD16都可以很好運(yùn)用到這一環(huán)節(jié)中來,下面以GD16為例:
    
    1 器材和設(shè)備
    1.1組織研磨儀GD16
    1.2離心管
    1.3 高速臺(tái)式冷凍離心機(jī):較大離心力12000g以上
    1.4冰箱
    1.5 熒光PCR檢測儀
    1.6 微量移液器和吸頭
    
    2 樣品的采集
    2.1采樣注意事項(xiàng)
    采樣及樣品前處理過程中應(yīng)戴一次性手套,樣本不得交叉污染。
    2.2采樣工具
    扁桃體采樣器:鼻捻子、開口器和采樣搶。使用前均應(yīng)用3%**溶液浸泡5Min~10Min,經(jīng)清水沖洗。
    滅菌牙簽和0.5ml或1.5ml離心管經(jīng)(121±2)℃,高壓滅菌15Min;剪、鑷經(jīng)160℃干烤2h。
    2.3 采樣方法
    2.3.1 活體樣品
    固定活豬的上唇,用開口器打開口腔,用采樣搶采取扁桃體樣品,用滅菌牙簽挑至0.5ml或1.5ml離心管并作標(biāo)記,編號(hào)送實(shí)驗(yàn)室。取待檢樣品,按1:5倍體積加入DEPC水,于研缽或組織勻漿器中充分研磨,3000g離心15min,取上清液轉(zhuǎn)入離心管中編號(hào)備用。
    2.3.2 內(nèi)臟樣品
    采取病死豬各種臟器(淋巴結(jié)、胰臟、脾臟、回腸、肝臟和腎臟)裝入一次性塑料袋或其他滅菌容器,編號(hào),送實(shí)驗(yàn)室。取50mg~100mg待檢樣品,按1:5倍體積加入DEPC水,于研缽或組織勻漿器中充分研磨,3000g離心15min,取上清液轉(zhuǎn)入離心管中編號(hào)備用。
    2.3.3  4%EDTA抗凝血
    用無菌注射器直接全血,注入含1/10 4%EDTA溶液的無菌容器中,充分混勻后編號(hào)備用。
    2.3.4 排泄物
    挑取少許糞便樣本于離心管中,加入適量生理鹽水,振蕩混勻,室溫3000g,離心管15min,取上清液轉(zhuǎn)入離心管中編號(hào)備用。其余液體排泄物直接轉(zhuǎn)入離心管編號(hào)備用。
    2.3.5 細(xì)胞培養(yǎng)物
    細(xì)胞培養(yǎng)物凍融3次,轉(zhuǎn)入離心管中編號(hào)備用。
    2.3.6 存放與運(yùn)送
    采集或處理的樣品在2℃~8℃條件下保存應(yīng)不**過24h;若需長期保存,應(yīng)放置-70℃冰箱,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(凍融不**過3次)。采集的樣品密封后,采用保溫壺或保溫桶加冰密封,在6h~8h之內(nèi)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室。按照《獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全技術(shù)管理規(guī)范》進(jìn)行樣品的生物安全標(biāo)識(shí)。
    
    3.實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測
    
    

    深圳市新銳科技發(fā)展有限公司專注于全自動(dòng)均質(zhì)器,全自動(dòng)均質(zhì)儀,全自動(dòng)分散機(jī),全自動(dòng)勻漿機(jī),全自動(dòng)氮吹儀等

  • 詞條

    詞條說明

  • 冷凍高通量組織研磨儀作用

    冷凍高通量組織研磨儀,能產(chǎn)生上下震蕩、曲線形旋渦震蕩。高通量組織研磨儀借助研磨珠(氧化鋯、鋼珠、玻璃珠、陶瓷珠)的往復(fù)振動(dòng)、撞擊、剪切, 能對(duì)樣品進(jìn)行快速、均勻的研磨。高通量組織研磨儀一次可同時(shí)處理36個(gè)樣品。對(duì)于難處理的土壤、頭發(fā)、骨骼、牙齒、頑固的細(xì)菌、真菌細(xì)胞壁,甚至孢子體的研磨效率非常高,且整個(gè)研磨過程用時(shí)短,并保留生物分子(DNA、RNA、蛋白質(zhì))和藥物分子的完整性。 液氮冷凍研磨必要性

  • 全自動(dòng)氮吹濃縮儀在樣品前處理中的應(yīng)用

    1預(yù)處理 對(duì)樣品進(jìn)行粉碎、混勻和縮分等過程稱為預(yù)處理。 固體樣品——含水較低,粉碎過篩。含水量較高取食用部分切碎或先烘干后粉碎過篩。 液體、漿體——攪拌混合均勻 互不相容的液體——先分離再取樣 特殊樣品——根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求特殊處理 2提取 浸提——針對(duì)固體樣品使待測組分轉(zhuǎn)移到提取液中 萃取——針對(duì)液體樣品,利用某組分在兩種互不相容的溶劑中的分配系數(shù)不同,從一種溶劑轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中,從而達(dá)到提取目的。

  • 深圳市龍崗區(qū)疾病預(yù)防控制中心小型儀器設(shè)備高速研磨均質(zhì)儀一批中標(biāo)公示

    本中心的??小型儀器設(shè)備一批 ?(編號(hào):LGCDC20180806)招標(biāo)項(xiàng)目已完成評(píng)審,現(xiàn)將有關(guān)結(jié)果公示如下: 貨物 數(shù)量 價(jià)格 中標(biāo)供應(yīng)商 GD16高速研磨均質(zhì)儀等 1批 81900元 深圳市忠德醫(yī)療器械有限公司 公示期為3個(gè)工作日,如有異議,請(qǐng)于公示期內(nèi)向我中心提出。 聯(lián)系人:陳先生 聯(lián)系電話:84515289?? 深圳市龍崗區(qū)疾病預(yù)防控制中心 公告日期:? 2018年8月21日 儀器用途多種

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